商品属性:
产品名称 |
规格 |
保存条件 |
货号 |
LBA4404电转感受态细胞 |
10×50μl/50×50 μl/10 μl |
-80℃(12个月) |
EY-01G98630 |
LBA4404菌株为Ach5型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pAL4404型Ti质粒含有筛选标签:strep,赋予LBA4404菌株链霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。BFB生命科学的LBA4404电转感受态细胞特别适用于大质粒的转化:经pCAMBIA2301质粒 (size:11633 bp)检测转化效率>1×105 cfu/μg DNA;经pCAMBIA2301-ZH质粒 (size:40 kb)检测转化效率可达1×103 cfu/μg DNA。
操作方法:
0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入1-5 μg质粒DNA(质粒体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解),用手拨打管底混匀,立即插入冰中,用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。
启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入700 μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。
6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28℃培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 时,需28℃培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h)。
注意事项:
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